活性試劑盒是一種利用熒光探針進行活性氧檢測的試劑盒。本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內(nèi)后，可以被細胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內(nèi)。細胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內(nèi)活性氧的水平。

 

　　活性試劑盒裝載探針對于刺激時間較短，通常為2小時以內(nèi)的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時間較長，通常為6小時以上的細胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞，后裝載探針。

 

　　原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養(yǎng)細胞。按照1∶1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10μmol/L。去除細胞培養(yǎng)液，加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1mL。37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20～30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

 

　　收集細胞后裝載探針：按照1∶1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10μmol/L。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細胞濃度為一百萬至二千萬/mL，37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3～5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞，或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20～30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。