活性試劑盒是一種利用熒光探針DCFH－DA進(jìn)行活性氧檢測(cè)的試劑盒。DCFH－DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜，從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測(cè)DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。

 

　　活性試劑盒對(duì)于刺激時(shí)間較短（通常為2小時(shí)以內(nèi)）的細(xì)胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對(duì)照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞。對(duì)于細(xì)胞刺激時(shí)間較長(zhǎng)（通常為6小時(shí)以上）的細(xì)胞，先用活性氧陽性對(duì)照或自己感興趣的藥物刺激細(xì)胞，后裝載探針。

 

　　細(xì)胞凋亡可通過兩種起始途徑啟動(dòng)，內(nèi)始式途徑由非受體刺激激活，如DNA損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、代謝應(yīng)激，線粒體外膜通透性改變，如細(xì)胞色素c釋放，外源途徑通過死亡受體與配體結(jié)合開始。

 

　　對(duì)于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細(xì)胞后用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。對(duì)于收集細(xì)胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。

 

　　注意事項(xiàng)：

 

　　1、盡量縮短探針裝載后到測(cè)定所用的時(shí)間（刺激時(shí)間除外），以減少各種可能的誤差。

 

　　2、探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。

 

　　3、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

　　4、探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描，以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。